Takk for at du besøker nature.com. Nettleserversjonen du bruker har begrenset CSS-støtte. For best mulig opplevelse anbefaler vi at du bruker den nyeste nettleserversjonen (eller slår av kompatibilitetsmodus i Internet Explorer). I tillegg, for å sikre fortsatt støtte, vil ikke dette nettstedet inkludere stiler eller JavaScript.
Melamin er en anerkjent matforurensning som kan være tilstede i visse matkategorier, både utilsiktet og med vilje. Målet med denne studien var å verifisere deteksjonen og kvantifiseringen av melamin i morsmelkerstatning og melkepulver. Totalt 40 kommersielt tilgjengelige matprøver, inkludert morsmelkerstatning og melkepulver, fra forskjellige regioner i Iran ble analysert. Det omtrentlige melamininnholdet i prøvene ble bestemt ved hjelp av et høytrykksvæskekromatografi-ultrafiolett (HPLC-UV) system. En kalibreringskurve (R2 = 0,9925) ble konstruert for deteksjon av melamin i området 0,1–1,2 μg mL⁻¹. Kvantifiserings- og deteksjonsgrensene var henholdsvis 1 μg mL⁻¹ og 3 μg mL⁻¹. Melamin ble testet i morsmelkerstatning og melkepulver, og resultatene viste at melaminnivåene i morsmelkerstatnings- og melkepulverprøvene var henholdsvis 0,001–0,095 mg kg⁻¹ og 0,001–0,004 mg kg⁻¹. Disse verdiene er i tråd med EU-lovgivningen og Codex Alimentarius. Det er viktig å merke seg at forbruket av disse melkeproduktene med redusert melamininnhold ikke utgjør en betydelig risiko for forbrukernes helse. Dette støttes også av resultatene av risikovurderingen.
Melamin er en organisk forbindelse med molekylformelen C3H6N6, utvunnet fra cyanamid. Den har svært lav løselighet i vann og er omtrent 66 % nitrogen. Melamin er en mye brukt industriell forbindelse med et bredt spekter av legitime bruksområder i produksjon av plast, gjødsel og utstyr for næringsmiddelforedling (inkludert matemballasje og kjøkkenutstyr)1,2. Melamin brukes også som legemiddelbærer for behandling av sykdommer. Den høye andelen nitrogen i melamin kan føre til misbruk av forbindelsen og at matingrediensenes egenskaper blir påvirket av proteinmolekyler3,4. Derfor øker tilsetning av melamin til matvarer, inkludert meieriprodukter, nitrogeninnholdet. Dermed ble det feilaktig konkludert med at proteininnholdet i melk var høyere enn det faktisk var.
For hvert gram melamin som tilsettes, vil proteininnholdet i maten øke med 0,4 %. Melamin er imidlertid svært løselig i vann og kan forårsake mer alvorlig skade. Å tilsette 1,3 gram melamin til flytende produkter som melk kan øke melkens proteininnhold med 30 %5,6. Selv om melamin tilsettes animalsk og til og med menneskelig mat for å øke proteininnholdet7, har Codex Alimentarius-kommisjonen (CAC) og nasjonale myndigheter ikke godkjent melamin som et tilsetningsstoff i mat og har listet det som farlig ved svelging, inhalering eller absorbert gjennom huden. I 2012 listet Verdens helseorganisasjons (WHO) internasjonale byrå for kreftforskning melamin som et kreftfremkallende stoff i klasse 2B fordi det kan være skadelig for menneskers helse8. Langvarig eksponering for melamin kan forårsake kreft eller nyreskade2. Melamin i mat kan danne komplekser med cyanursyre for å danne vannuløselige gule krystaller som kan forårsake skade på nyre- og blærevev, samt urinveiskreft og vekttap9,10. Det kan forårsake akutt matforgiftning og, i høye konsentrasjoner, død, spesielt hos spedbarn og små barn.11 Verdens helseorganisasjon (WHO) har også satt det tolerable daglige inntaket (TDI) av melamin for mennesker til 0,2 mg/kg kroppsvekt per dag basert på CAC-retningslinjer.12 Det amerikanske mat- og legemiddeltilsynet (FDA) har satt den maksimale restmengden for melamin til 1 mg/kg i morsmelkerstatning og 2,5 mg/kg i annen mat.2,7 I september 2008 ble det rapportert at flere innenlandske produsenter av morsmelkerstatning hadde tilsatt melamin i melkepulver for å øke proteininnholdet i produktene sine, noe som resulterte i melkepulverforgiftning og utløste en landsdekkende melaminforgiftningshendelse som gjorde mer enn 294 000 barn syke og mer enn 50 000 innlagt på sykehus. 13
Amming er ikke alltid mulig på grunn av ulike faktorer, som vanskeligheter med bylivet, sykdom hos mor eller barn, noe som fører til bruk av morsmelkerstatning til å mate spedbarn. Som et resultat har det blitt etablert fabrikker for å produsere morsmelkerstatning som er så lik morsmelk som mulig i sammensetning14. Morsmelkerstatning som selges på markedet er vanligvis laget av kumelk og er vanligvis laget med en spesiell blanding av fett, proteiner, karbohydrater, vitaminer, mineraler og andre forbindelser. For å være nær morsmelk varierer protein- og fettinnholdet i morsmelkerstatningen, og avhengig av melketypen er den beriket med forbindelser som vitaminer og mineraler som jern15. Siden spedbarn er en sensitiv gruppe og det er risiko for forgiftning, er sikkerheten ved forbruk av melkepulver av avgjørende betydning for helsen. Etter melaminforgiftningssaken blant kinesiske spedbarn har land over hele verden viet denne problemstillingen stor oppmerksomhet, og sensitiviteten på dette området har også økt. Derfor er det spesielt viktig å styrke kontrollen med produksjon av morsmelkerstatning for å beskytte spedbarns helse. Det finnes ulike metoder for å påvise melamin i mat, inkludert høytrykksvæskekromatografi (HPLC), elektroforese, sensorisk metode, spektrofotometri og antigen-antistoff enzymbundet immunosorbentanalyse16. I 2007 utviklet og publiserte det amerikanske mat- og legemiddeltilsynet (FDA) en HPLC-metode for bestemmelse av melamin og cyanursyre i mat, som er den mest effektive metoden for å bestemme melamininnhold17.
Melaminkonsentrasjoner i morsmelkerstatning målt ved hjelp av en ny infrarødspektroskopiteknikk varierte fra 0,33 til 0,96 milligram per kilogram (mg kg⁻¹). 18 En studie i Sri Lanka fant melaminnivåer i helmelkpulver som varierte fra 0,39 til 0,84 mg kg⁻¹. I tillegg inneholdt importerte morsmelkerstatningsprøver de høyeste nivåene av melamin, henholdsvis 0,96 og 0,94 mg/kg. Disse nivåene er under den regulatoriske grensen (1 mg/kg), men et overvåkingsprogram er nødvendig for forbrukersikkerheten. 19
Flere studier har undersøkt nivåene av melamin i iranske morsmelkerstatninger. Omtrent 65 % av prøvene inneholdt melamin, med et gjennomsnitt på 0,73 mg/kg og et maksimum på 3,63 mg/kg. En annen studie rapporterte at nivået av melamin i morsmelkerstatning varierte fra 0,35 til 3,40 μg/kg, med et gjennomsnitt på 1,38 μg/kg. Totalt sett har tilstedeværelsen og nivået av melamin i iranske morsmelkerstatninger blitt vurdert i ulike studier, med noen prøver som inneholder melamin som overstiger maksimumsgrensen satt av reguleringsmyndighetene (2,5 mg/kg/fôr).
Med tanke på det enorme direkte og indirekte forbruket av melkepulver i næringsmiddelindustrien og den spesielle betydningen av morsmelkerstatning i barns ernæring, hadde denne studien som mål å validere metoden for påvisning av melamin i melkepulver og morsmelkerstatning. Faktisk var det første målet med denne studien å utvikle en rask, enkel og nøyaktig kvantitativ metode for å påvise melaminforfalskning i morsmelkerstatning og melkepulver ved hjelp av høytrykksvæskekromatografi (HPLC) og ultrafiolett (UV) deteksjon. For det andre var målet med denne studien å bestemme melamininnholdet i morsmelkerstatning og melkepulver som selges på det iranske markedet.
Instrumentene som brukes til melaminanalyse varierer avhengig av matproduksjonsstedet. En sensitiv og pålitelig HPLC-UV-analysemetode ble brukt til å måle melaminrester i melk og morsmelkerstatning. Meieriprodukter inneholder forskjellige proteiner og fettstoffer som kan forstyrre melaminmålingen. Derfor, som bemerket av Sun et al. 22, er en passende og effektiv oppryddingstrategi nødvendig før instrumentanalyse. I denne studien brukte vi engangssprøytefiltre. I denne studien brukte vi en C18-kolonne for å separere melamin i morsmelkerstatning og melkepulver. Figur 1 viser kromatogrammet for melamindeteksjon. I tillegg varierte gjenvinningen av prøvene som inneholdt 0,1–1,2 mg/kg melamin fra 95 % til 109 %, regresjonsligningen var y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), og verdiene for relativ standardavvik (RSD) varierte fra 0,8 til 2 %. De tilgjengelige dataene indikerer at metoden er pålitelig i det studerte konsentrasjonsområdet (tabell 1). Den instrumentelle deteksjonsgrensen (LOD) og kvantifiseringsgrensen (LOQ) for melamin var henholdsvis 1 μg mL⁻¹ og 3 μg mL⁻¹. I tillegg viste UV-spekteret til melamin et absorpsjonsbånd ved 242 nm. Deteksjonsmetoden er sensitiv, pålitelig og nøyaktig. Denne metoden kan brukes til rutinemessig bestemmelse av melaminnivået.
Lignende resultater har blitt publisert av flere forfattere. En høytrykksvæskekromatografi-fotodiodearray (HPLC)-metode ble utviklet for analyse av melamin i meieriprodukter. De nedre kvantifiseringsgrensene var 340 μg kg−1 for melkepulver og 280 μg kg−1 for morsmelkerstatning ved 240 nm. Filazzi et al. (2012) rapporterte at melamin ikke ble påvist i morsmelkerstatning ved HPLC. Imidlertid inneholdt 8 % av melkepulverprøvene melamin i et nivå på 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 gjennomførte en lignende studie og bestemte melamininnholdet i morsmelkerstatning (prøvenummer: 72) ved hjelp av høytrykksvæskekromatografi-massespektrometri/MS (HPLC-MS/MS) til å være omtrent 0,0431–0,346 mg kg−1. I en studie utført av Venkatasamy et al. (2010) ble en grønn kjemitilnærming (uten acetonitril) og reversfase høytrykksvæskekromatografi (RP-HPLC) brukt til å estimere melamin i morsmelkerstatning og melk. Prøvekonsentrasjonsområdet var fra 1,0 til 80 g/ml, og responsen var lineær (r > 0,999). Metoden viste gjenvinninger på 97,2–101,2 over konsentrasjonsområdet 5–40 g/ml, og reproduserbarheten var mindre enn 1,0 % relativt standardavvik. Videre var den observerte LOD og LOQ henholdsvis 0,1 g mL⁻¹ og 0,2 g mL⁻¹²⁴. Lutter et al. (2011) bestemte melaminforurensning i kumelk og melkebasert morsmelkerstatning ved bruk av HPLC-UV. Melaminkonsentrasjonene varierte fra < 0,2 til 2,52 mg kg⁻¹. Det lineære dynamiske området for HPLC-UV-metoden var 0,05 til 2,5 mg kg−1 for kumelk, 0,13 til 6,25 mg kg−1 for morsmelkerstatning med en proteinmassefraksjon på <15 %, og 0,25 til 12,5 mg kg−1 for morsmelkerstatning med en proteinmassefraksjon på 15 %. LOD- og LOQ-resultatene var 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) for kumelk, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) for morsmelkerstatning <15 % protein, og 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) for morsmelkerstatning med 15 % protein, med et signal-til-støy-forhold på henholdsvis 3 og 1025 for LOD og LOQ. Diebes et al. (2012) undersøkte melaminnivåer i morsmelkerstatnings- og melkepulverprøver ved hjelp av HPLC/DMD. I morsmelkerstatning var de laveste og høyeste nivåene henholdsvis 9,49 mg kg−1 og 258 mg kg−1. Deteksjonsgrensen (LOD) var 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. rapporterte at melaminrester i morsmelkerstatning var i området 0,002–2 mg kg−1 ved hjelp av Fourier-transform infrarødspektroskopi (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 foreslo en HPLC-DDA (λ = 220 nm) metode for å estimere melamin og oppnådde en LOQ på 0,08 μg mL−1 for melkepulver, som var lavere enn nivået oppnådd i denne studien. Sun et al. utviklet en RP-HPLC-DAD for deteksjon av melamin i flytende melk ved fastfaseekstraksjon (SPE). De oppnådde en LOD og LOQ på henholdsvis 18 og 60 μg kg−128, som er mer følsomt enn den nåværende studien. Montesano et al. bekreftet effektiviteten til HPLC-DMD-metoden for vurdering av melamininnhold i proteintilskudd med en kvantifiseringsgrense på 0,05–3 mg/kg, som var mindre sensitiv enn metoden som ble brukt i denne studien29.
Analytiske laboratorier spiller utvilsomt en viktig rolle i å beskytte miljøet ved å overvåke forurensende stoffer i ulike prøver. Bruk av et stort antall reagenser og løsemidler under analyse kan imidlertid føre til dannelse av farlige rester. Derfor ble grønn analytisk kjemi (GAC) utviklet i 2000 for å redusere eller eliminere de negative effektene av analytiske prosedyrer på operatører og miljøet26. Tradisjonelle melamindeteksjonsmetoder, inkludert kromatografi, elektroforese, kapillærelektroforese og enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA), har blitt brukt til å identifisere melamin. Blant de mange deteksjonsmetodene har imidlertid elektrokjemiske sensorer fått mye oppmerksomhet på grunn av deres utmerkede følsomhet, selektivitet, raske analysetid og brukervennlige egenskaper30,31. Grønn nanoteknologi bruker biologiske veier for å syntetisere nanomaterialer, noe som kan redusere genereringen av farlig avfall og energiforbruk, og dermed fremme implementeringen av bærekraftig praksis. Nanokompositter, for eksempel laget av miljøvennlige materialer, kan brukes i biosensorer for å oppdage stoffer som melamin32,33,34.
Studien viser at fastfase-mikroekstraksjon (SPME) brukes effektivt på grunn av høyere energieffektivitet og bærekraft sammenlignet med tradisjonelle ekstraksjonsmetoder. Miljøvennligheten og energieffektiviteten til SPME gjør det til et utmerket alternativ til tradisjonelle ekstraksjonsmetoder innen analytisk kjemi og gir en mer bærekraftig og effektiv metode for prøvepreparering.
I 2013 utviklet Wu et al. en svært sensitiv og selektiv overflateplasmonresonans (mini-SPR) biosensor som benytter koblingen mellom melamin og anti-melamin-antistoffer for raskt å oppdage melamin i morsmelkerstatning ved hjelp av en immunanalyse. SPR-biosensoren kombinert med en immunanalyse (ved bruk av melaminkonjugert bovint serumalbumin) er en brukervennlig og rimelig teknologi med en deteksjonsgrense på bare 0,02 μg mL-136.
Nasiri og Abbasian brukte en bærbar sensor med høyt potensial i kombinasjon med grafenoksid-kitosan-kompositter (GOCS) for å detektere melamin i kommersielle prøver37. Denne metoden viste ultrahøy selektivitet, nøyaktighet og respons. GOCS-sensoren viste bemerkelsesverdig følsomhet (239,1 μM−1), et lineært område på 0,01 til 200 μM, en affinitetskonstant på 1,73 × 104 og en LOD på opptil 10 nM. Dessuten benyttet en studie utført av Chandrasekhar et al. i 2024 en miljøvennlig og kostnadseffektiv tilnærming. De brukte papaya-ekstrakt som et reduksjonsmiddel for å syntetisere sinkoksid-nanopartikler (ZnO-NP-er) på en miljøvennlig måte. Deretter ble en unik mikro-Raman-spektroskopiteknikk utviklet for bestemmelse av melamin i morsmelkerstatning. ZnO-NP-er utvunnet fra landbruksavfall har vist potensial som et verdifullt diagnostisk verktøy og en pålitelig, rimelig teknologi for overvåking og detektering av melamin38.
Alizadeh et al. (2024) brukte en svært følsom fluorescensplattform med metallorganisk rammeverk (MOF) for å bestemme melamin i melkepulver. Det lineære området og den nedre deteksjonsgrensen for sensoren, bestemt ved bruk av 3σ/S, var henholdsvis 40 til 396,45 nM (tilsvarende 25 μg kg−1 til 0,25 mg kg−1) og 40 nM (tilsvarende 25 μg kg−1). Dette området er godt under de maksimale restnivåene (MRL-er) som er satt for identifisering av melamin i morsmelkerstatning (1 mg kg−1) og andre mat-/fôrprøver (2,5 mg kg−1). Fluorescerende sensor (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) viste høyere nøyaktighet og mer presis målekapasitet enn HPLC39 i deteksjon av melamin i melkepulver. Biosensorer og nanokompositter i grønn kjemi forbedrer ikke bare deteksjonskapasiteten, men minimerer også miljøfarer i tråd med prinsipper for bærekraftig utvikling.
Prinsipper for grønn kjemi har blitt anvendt på ulike metoder for bestemmelse av melamin. Én tilnærming er utviklingen av en grønn dispersiv fastfase-mikroekstraksjonsmetode ved bruk av den naturlige polare polymeren β-cyklodekstrin tverrbundet med sitronsyre for effektiv ekstraksjon av melamin 40 fra prøver som morsmelkerstatning og varmt vann. En annen metode bruker Mannich-reaksjonen for bestemmelse av melamin i melkeprøver. Denne metoden er billig, miljøvennlig og svært nøyaktig med et lineært område på 0,1–2,5 ppm og en lav deteksjonsgrense 41. Videre ble en kostnadseffektiv og miljøvennlig metode for kvantitativ bestemmelse av melamin i flytende melk og morsmelkerstatning utviklet ved bruk av Fourier-transform infrarød transmisjonsspektroskopi med høy nøyaktighet og deteksjonsgrenser på henholdsvis 1 ppm og 3,5 ppm 42. Disse metodene demonstrerer anvendelsen av prinsipper for grønn kjemi for utvikling av effektive og bærekraftige metoder for bestemmelse av melamin.
Flere studier har foreslått innovative metoder for melamindeteksjon, som bruk av fastfaseekstraksjon og høytrykksvæskekromatografi (HPLC)43, samt rask høytrykksvæskekromatografi (HPLC), som ikke krever kompleks forbehandling eller ioneparreagenser, og dermed reduserer mengden kjemisk avfall44. Disse metodene gir ikke bare nøyaktige resultater for bestemmelse av melamin i meieriprodukter, men overholder også prinsippene for grønn kjemi, minimerer bruken av farlige kjemikalier og reduserer den totale miljøpåvirkningen av den analytiske prosessen.
Førti prøver av forskjellige merker ble testet i tre eksemplarer, og resultatene er presentert i tabell 2. Melaminnivåene i morsmelkerstatnings- og melkepulverprøvene varierte fra henholdsvis 0,001 til 0,004 mg/kg og fra 0,001 til 0,095 mg/kg. Ingen signifikante endringer ble observert mellom de tre aldersgruppene for morsmelkerstatning. I tillegg ble melamin påvist i 80 % av melkepulveret, men 65 % av morsmelkerstatningene var forurenset med melamin.
Melamininnholdet i industrimelkpulver var høyere enn i morsmelkerstatning, og forskjellen var signifikant (p < 0,05) (figur 2).
Resultatene som ble oppnådd var under grenseverdiene satt av FDA (under 1 og 2,5 mg/kg). I tillegg er resultatene i tråd med grenseverdiene satt av CAC (2010) og EU45,46, dvs. at den maksimalt tillatte grensen er 1 mg kg-1 for morsmelkerstatning og 2,5 mg kg-1 for meieriprodukter.
Ifølge en studie fra 2023 av Ghanati et al.47 varierte melamininnholdet i ulike typer pakket melk i Iran fra 50,7 til 790 μg kg−1. Resultatene deres var under FDAs tillatte grense. Våre resultater er lavere enn resultatene til Shoder et al.48 og Rima et al.49. Shoder et al. (2010) fant at melaminnivåene i melkepulver (n=49) bestemt ved ELISA varierte fra 0,5 til 5,5 mg/kg. Rima et al. analyserte melaminrester i melkepulver ved hjelp av fluorescensspektrofotometri og fant at melamininnholdet i melkepulver var 0,72–5,76 mg/kg. En studie ble utført i Canada i 2011 for å overvåke melaminnivåene i morsmelkerstatning (n=94) ved hjelp av væskekromatografi (LC/MS). Melaminkonsentrasjonene ble funnet å være under den akseptable grensen (foreløpig standard: 0,5 mg kg−1). Det er usannsynlig at de falske melaminnivåene som ble oppdaget var en taktikk som ble brukt for å øke proteininnholdet. Det kan imidlertid ikke forklares med bruk av gjødsel, flytting av beholderinnhold eller lignende faktorer. Videre ble ikke kilden til melamin i melkepulver importert til Canada oppgitt50.
Hassani et al. målte melamininnholdet i melkepulver og flytende melk på det iranske markedet i 2013 og fant lignende resultater. Resultatene viste at bortsett fra ett merke melkepulver og flytende melk, var alle andre prøver forurenset med melamin, med nivåer fra 1,50 til 30,32 μg g−1 i melkepulver og 0,11 til 1,48 μg ml−1 i melk. Det er verdt å merke seg at cyanursyre ikke ble påvist i noen av prøvene, noe som reduserte muligheten for melaminforgiftning for forbrukere. 51 Tidligere studier har vurdert melaminkonsentrasjonen i sjokoladeprodukter som inneholder melkepulver. Omtrent 94 % av importerte prøver og 77 % av iranske prøver inneholdt melamin. Melaminnivåene i importerte prøver varierte fra 0,032 til 2,692 mg/kg, mens nivåene i iranske prøver varierte fra 0,013 til 2600 mg/kg. Totalt sett ble melamin påvist i 85 % av prøvene, men bare ett spesifikt merke hadde nivåer over den tillatte grensen.44 Tittlemier et al. rapporterte melaminnivåer i melkepulver som varierte fra 0,00528 til 0,0122 mg/kg.
Tabell 3 oppsummerer resultatene fra risikovurderingen for de tre aldersgruppene. Risikoen var mindre enn 1 i alle aldersgrupper. Dermed er det ingen ikke-kreftfremkallende helserisiko fra melamin i morsmelkerstatning.
Lavere nivåer av forurensning i meieriprodukter kan skyldes utilsiktet forurensning under tilberedning, mens høyere nivåer kan skyldes bevisste tilsetninger. Videre anses den samlede risikoen for menneskers helse ved å konsumere meieriprodukter med lave melaminnivåer som lav. Det kan konkluderes med at konsum av produkter som inneholder så lave nivåer av melamin ikke utgjør noen risiko for forbrukernes helse52.
Med tanke på viktigheten av mattrygghetsstyring i meieriindustrien, spesielt med tanke på å beskytte folkehelsen, er det av største betydning å utvikle og validere en metode for å vurdere og sammenligne melaminnivåer og -rester i melkepulver og morsmelkerstatning. En enkel og nøyaktig HPLC-UV-spektrofotometrisk metode ble utviklet for bestemmelse av melamin i morsmelkerstatning og melkepulver. Metoden ble validert for å sikre dens pålitelighet og nøyaktighet. Metodens deteksjons- og kvantifiseringsgrenser viste seg å være følsomme nok til å måle melaminnivåer i morsmelkerstatning og melkepulver. I følge våre data ble melamin påvist i de fleste av de iranske prøvene. Alle påviste melaminnivåer var under de maksimalt tillatte grensene satt av CAC, noe som indikerer at forbruk av denne typen meieriprodukter ikke utgjør en risiko for menneskers helse.
Alle kjemiske reagenser som ble brukt var av analytisk kvalitet: melamin (2,4,6-triamino-1,3,5-triazin) 99 % rent (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); HPLC-kvalitet acetonitril (Merck, Darmstadt, Tyskland); ultrarent vann (Millipore, Morfheim, Frankrike). Engangssprøytefiltre (Chromafil Xtra PVDF-45/25, porestørrelse 0,45 μm, membrandiameter 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Tyskland).
Et ultralydbad (Elma, Tyskland), en sentrifuge (Beckman Coulter, Krefeld, Tyskland) og HPLC (KNAUER, Tyskland) ble brukt til å preparere prøvene.
En høytrykksvæskekromatograf (KNAUER, Tyskland) utstyrt med en UV-detektor ble brukt. HPLC-analysebetingelsene var som følger: et UHPLC Ultimate-system utstyrt med en ODS-3 C18 analytisk kolonne (4,6 mm × 250 mm, partikkelstørrelse 5 μm) (MZ, Tyskland) ble brukt. HPLC-eluenten (mobil fase) var en TFA/metanol-blanding (450:50 ml) med en strømningshastighet på 1 ml min-1. Deteksjonsbølgelengden var 242 nm. Injeksjonsvolumet var 100 μL, og kolonnetemperaturen var 20 °C. Siden retensjonstiden til legemidlet er lang (15 minutter), bør neste injeksjon gjøres etter 25 minutter. Melamin ble identifisert ved å sammenligne retensjonstiden og UV-spektrumtoppen til melaminstandarder.
En standardløsning av melamin (10 μg/ml) ble fremstilt med vann og oppbevart i kjøleskap (4 °C) unna lys. Fortynn stamløsningen med den mobile fasen og lag standardløsninger. Hver standardløsning ble injisert i HPLC-en 7 ganger. Kalibreringsligning 10 ble beregnet ved regresjonsanalyse av det bestemte topparealet og den bestemte konsentrasjonen.
Kommersielt tilgjengelig kumelkpulver (20 prøver) og prøver av forskjellige merker av kumelkbasert morsmelkerstatning (20 prøver) ble kjøpt fra lokale supermarkeder og apotek i Iran for å mate spedbarn i forskjellige aldersgrupper (0–6 måneder, 6–12 måneder og >12 måneder) og oppbevart ved kjøleskapstemperatur (4 °C) inntil analyse. Deretter ble 1 ± 0,01 g homogenisert melkepulver veid og blandet med acetonitril:vann (50:50, v/v; 5 ml). Blandingen ble omrørt i 1 minutt, deretter sonikert i et ultralydbad i 30 minutter og til slutt ristet i 1 minutt. Blandingen ble deretter sentrifugert ved 9000 × g i 10 minutter ved romtemperatur, og supernatanten ble filtrert over i et 2 ml autosampler-hetteglass ved hjelp av et 0,45 μm sprøytefilter. Filtratet (250 μl) ble deretter blandet med vann (750 μl) og injisert i HPLC-systemet10,42.
For å validere metoden bestemte vi gjenfinning, nøyaktighet, deteksjonsgrense (LOD), kvantifiseringsgrense (LOQ) og presisjon under optimale forhold. LOD ble definert som prøveinnholdet med en topphøyde tre ganger grunnlinjestøynivået. På den annen side ble prøveinnholdet med en topphøyde 10 ganger signal-til-støy-forholdet definert som LOQ.
Enhetens respons ble bestemt ved hjelp av en kalibreringskurve bestående av syv datapunkter. Ulike melamininnhold ble brukt (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 og 1,2). Lineariteten til melaminberegningsprosedyren ble bestemt. I tillegg ble flere forskjellige nivåer av melamin tilsatt blindprøvene. Kalibreringskurven ble konstruert ved kontinuerlig å injisere 0,1–1,2 μg mL⁻¹ av en standard melaminløsning i morsmelkerstatning og melkepulverprøver, og dens R2 = 0,9925. Nøyaktigheten ble vurdert ved repeterbarhet og reproduserbarhet av prosedyren, og ble oppnådd ved å injisere prøver den første og de tre påfølgende dagene (i triplikat). Repeterbarheten til metoden ble vurdert ved å beregne RSD % for tre forskjellige konsentrasjoner av tilsatt melamin. Gjenvinningsstudier ble utført for å bestemme presisjonen. Gjenvinningsgraden ved ekstraksjonsmetoden ble beregnet ved tre nivåer av melaminkonsentrasjon (0,1, 1,2, 2) i prøver av morsmelkerstatning og tørrmelk9,11,15.
Estimert daglig inntak (EDI) ble bestemt ved hjelp av følgende formel: EDI = Ci × Cc/BW.
Der Ci er det gjennomsnittlige melamininnholdet, Cc er melkeforbruket og BW er barns gjennomsnittsvekt.
Dataanalysen ble utført ved hjelp av SPSS 24. Normalitet ble testet ved hjelp av Kolmogorov-Smirnov-testen; alle data var ikke-parametriske tester (p = 0). Derfor ble Kruskal-Wallis-testen og Mann-Whitney-testen brukt til å bestemme signifikante forskjeller mellom gruppene.
Ingelfinger, jr. Melamin og dens innvirkning på global matforurensning. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Effekt av pH på melaminmigrasjon i barns skåler. International Journal of Food Contamination, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP og Gilbert, IH Målretting av giftige forbindelser mot det indre av trypanosomer. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, et al. In vitro- og in vivo-evaluering av melamindendrimerer som legemiddelleveringsvehikler. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
Verdens helseorganisasjon. Ekspertmøter 1–4 for å gjennomgå de toksikologiske aspektene ved melamin og cyanursyre (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH og Lee, PK-T. Melamintoksisitet og nyren. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. og Demir, N. Utvikling av et nytt IMAC-adsorbent for identifisering av melamin i meieriprodukter ved hjelp av høytrykksvæskekromatografi (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. og Imim, A. Enkel spektrofotometrisk bestemmelse av melamin i flytende melk basert på Mannich-grønnreaksjon. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. og El-Habib, R. Bestemmelse av melamin i morsmelkerstatning, melkepulver og pangasiusprøver ved HPLC/diodearray-kromatografi. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD, og ​​Osterloh, JD Melamintoksisitet. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Verdens helseorganisasjon (WHO), Toksikologi og helseaspekter ved melamin og cyanursyre: Rapport fra et WHO/FAO-ekspertmøte støttet av Health Canada, Ottawa, Canada, 1.–4. desember 2008 (2009).
Korma, SA, et al. Sammenlignende studie av lipidsammensetning og kvalitet på morsmelkerstatningspulver som inneholder nye funksjonelle strukturelle lipider og kommersiell morsmelkerstatning. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. og Hashem, H. Forbedring av næringsverdi, kvalitetsegenskaper og holdbarhet for morsmelkerstatning ved bruk av palmeolje. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Produksjon av monoklonale antistoffer mot melamin og utvikling av en indirekte konkurrerende ELISA-metode for påvisning av melamin i rå melk, tørrmelk og dyrefôr. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).